熒光顯微鏡標(biāo)本制作材料及方法

熒光顯微鏡標(biāo)本制作材料及方法

熒光樣本制作所需材料

(一)載玻片

滑板厚度應(yīng)在0.8毫米至1.2毫米之間。工業(yè)視頻顯微鏡將傳統(tǒng)的顯微鏡與攝像系統(tǒng),顯示器或者電腦相結(jié)合,達(dá)到對(duì)被測(cè)物體的放大觀察的目的。金相顯微鏡電腦型金相顯微鏡或是數(shù)碼金相顯微鏡是將光學(xué)顯微鏡技術(shù)、光電轉(zhuǎn)換技術(shù)、計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)**地結(jié)合在一起而開(kāi)發(fā)研制成的高科技產(chǎn)品，可以在計(jì)算機(jī)上很方便地觀察金相圖像，從而對(duì)金相圖譜進(jìn)行分析，評(píng)級(jí)等以及對(duì)圖片進(jìn)行輸出、打印。體視顯微鏡指從不同角度觀察物體,使雙眼引起立體感覺(jué)的雙目顯微鏡。過(guò)厚的斜坡一方面可以吸收更多的光，另一方面也不能使激發(fā)光聚集在試樣上。切片必須光滑，厚度均勻，沒(méi)有明顯的自體熒光。有時(shí)使用石英玻璃載玻片。

(二)蓋玻片

蓋玻片約0.17mm厚，光滑。為了增強(qiáng)激發(fā)光，也可以使用干涉蓋玻片。這是一種特殊的蓋玻片，表面涂有幾層對(duì)不同波長(zhǎng)的光有不同干涉作用的物質(zhì)(如氟化鎂)。能使熒光順利通過(guò)，反射激發(fā)光，激發(fā)標(biāo)本。

(三)標(biāo)本

組織切片或其他標(biāo)本不能太厚，如太厚激發(fā)中國(guó)光大這一部分企業(yè)消耗在標(biāo)本下部，而物鏡直接可以觀察到的上部不充分問(wèn)題激發(fā)。另外，細(xì)胞重迭或雜質(zhì)掩蓋，影響分析判斷。

(四)封裱劑

甘油通常用作密封劑，它必須無(wú)自發(fā)熒光，無(wú)色透明，熒光亮度在pH8.5～9.5范圍內(nèi)明亮，不易迅速褪色。 因此，通常使用pH 9.0-9.5的甘油和0.5mol/l碳酸鹽緩沖液的相等混合物作為密封劑。

(五)鏡油

在金相熒光顯微鏡和油鏡觀察樣品時(shí)，需要使用鏡油，請(qǐng)使用專用非熒光鏡油，或使用上述甘油，也可以使用液體石蠟，但折射率低，對(duì)圖像質(zhì)量影響不大。

熒光標(biāo)本的制作方法：

樣品必須石蠟包埋，然后用蘇木精鐵礬染色，普通工業(yè)顯微鏡也可用熒光 DAPI 染色觀察,

石蠟切片的過(guò)程：

1. 取材：刀片要求鋒利而薄,組織厚度約2—3mm, 大小1.5×1.5×0.2～0.3cm為宜. 取材時(shí)間越快越好.

2. 固定: 組織可以取下后應(yīng)立即將其放入10%福爾馬林(相當(dāng)于4%甲醛)固定.

注: (1)固定劑的體積應(yīng)為組織塊體積的40倍。

固定時(shí)間：固定時(shí)間與所用固定液的類型、組織塊的大小、溫度等有關(guān)，一般為3h-24h。

(3)固定工作溫度：大多企業(yè)可在室溫以及固定, 在低溫(4℃)時(shí)間應(yīng)延長(zhǎng).

(4)固定容器:固定容器要大一些。

3. 漂洗：流水沖洗2—10h.

4. 脫水: 從低濃度酒精到高濃度酒精.

70%（分鐘）→ 80%（60-120'）→ 90%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ 95%（60-120'）→ ****（60-120'）→ ****（60-120'）。

5.透明: 組織塊脫水后，必須通過(guò)溶劑與酒精混合溶解石蠟，然后石蠟進(jìn)入組織塊。常用的二甲苯，一般浸泡30米即可。

6.浸蠟:將透明后的組織浸入融化的石蠟中的過(guò)程稱為浸蠟。一般需要蘸2-3次，總時(shí)間3-4小時(shí)。浸蠟用石蠟的熔點(diǎn)為52-56℃。

7. 包埋: 先將熔化的石蠟溶液倒入其中包埋框再用一個(gè)加熱的鑷子將組織塊放入.